产品货号：
BTN15-53710
中文名称：
酵母菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：
产品规格：
50次
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1～3天
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本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测酵母菌属通用的试剂盒。
酵母菌属(Saccharomyces)是一种单细胞生物重要真菌，可在缺氧环境中生存，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，也是人类直接食用量最大的一种微生物。酵母菌体含有丰富的蛋白质、脂肪、糖分和B族维生素以及中间产物，能提高发酵食品的营养价值，使制品疏松，改善食品风味，也具有保护肝脏、解毒、抗衰老、抗肿瘤、预防动脉硬化、提高人体的免疫力等功能。酵母也是引起食物变质得优势菌种，因此快速检测酵母菌属具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无活性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：酵母菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
酵母菌属(Saccharomyces)是一种单细胞生物重要真菌，可在缺氧环境中生存，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，也是人类直接食用量最大的一种微生物。酵母菌体含有丰富的蛋白质、脂肪、糖分和B族维生素以及中间产物，能提高发酵食品的营养价值，使制品疏松，改善食品风味，也具有保护肝脏、解毒、抗衰老、抗肿瘤、预防动脉硬化、提高人体的免疫力等功能。酵母也是引起食物变质得优势菌种，因此快速检测酵母菌属具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高，可以达到200拷贝左右/反应。
- 特异性高，引物是根据酵母菌属高度保守区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
- 种属涵盖广，至少可以扩增14种酵母，包括Candida utilis、Candida
parasilosis、Debaryomtces hansenii、Pichia carsonii、Pichia jadinii、Pichia spartinae、Rhodotorula rubra、Saccharomycopsis lipolitica、Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces uvarum、Torulaspora
delbrueckii、Toruiopsis candida和Toruiopsis glutinis. - 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 酵母菌属通用探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 酵母菌属通用探针法qPCR探针 | 50μL |
| 酵母菌属通用qPCR阳性对照2.0(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无活性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用上步得到的第4号稀释液再加上一定量的水(使弃总体积跟每次制备要求的样品起始体积一样)，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数真菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的真菌DNA提取试剂盒或柱式真菌DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号：BTN61202
下载。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号，其余样品不变)。
以下只介绍定量分析的反应设置。 - 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 酵母菌属通用qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 酵母菌属通用探针法qPCR
引物混合液2μL 2μL 各2μL N+2个待测样品DNA模板 6μL 不加 不加 超纯水 不加 6μL 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(40个循环)94℃ 10sec 60℃ 40sec
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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